Anemia falciforme é uma doença genética causada pela mutação no gene da globina beta, resultando na produção de hemoglobina S (HbS) e deformação das hemácias. A hemoglobina fetal (HbF) desempenha um papel importante na redução das complicações associadas à anemia falciforme. A hidroxiureia (HU) é a terapia padrão para aumentar os níveis de HbF, mas a resposta ao tratamento varia entre os pacientes. Este estudo visa desenvolver um método preciso para quantificar HbF em células F e correlacionar essa medição com as manifestações clínicas da doença. Utilizando o citômetro de fluxo Amnis ImagestreamX MKII, foi possível calcular a concentração de HbF e a porcentagem de células F com maior precisão. A mediana da HbF calculada foi de 8,23 picogramas, com uma mediana de 66,5 para células F. Pacientes com concentrações de HbF ≥8 pg e ≥50 células F apresentaram menor incidência de crises vaso-oclusivas e retinopatia, além de menores marcadores de hemólise. A nova fórmula desenvolvida mostrou-se útil para avaliar a gravidade da doença e a eficácia do tratamento com HU, sugerindo uma melhora na gestão clínica da anemia falciforme.